Fraccionamiento de los venenos de las serpientes Micrurus mipartitus y Bothrops asper e identificación de las fracciones con actividad permeabilizante en membranas de fosfolípidos

Abstract

Con este trabajo se pretende fortalecer la línea de investigación en toxinología en la Universidad del Valle y Cauca, que permitirá conocer la naturaleza y características bioquímicas del veneno específicamente la acción degradante de membrana de la enzima con actividad tipo fosfolipasa A2 (PLA2) a través de la comparación del veneno de la serpiente Bothrops asper especie ampliamente estudiada y de la cual ya se tienen algunos reportes de su actividad fosfolipídica con el veneno de la especie Micrurus mipartitus. De la cual no se conoce reporte alguno de la acción enzimática de la proteína aislada. El proceso metodológico empleado en el fraccionamiento del veneno entero de las dos especies de serpientes escogidas, consistió en una primera etapa de separación por cromatografía por exclusión molecular, seguida de una separación por cromatografía de intercambio iónico y finalmente por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). A cada fracción se determinó la cantidad de proteína aislada. Se identificaron las fracciones con activad tipo PLA2 a través de la prueba de hemólisis indirecta y de electroforesis en gel. Finalmente, la fracción con actividad tipo PLA2 obtenida por HPLC se utilizó para determinar su acción desestabilizante sobre bicapas artificiales de fosfolípidos, en ausencia y en presencia de calcio. Considerando, su reconocida actividad hemolítica y miotóxica, y con fines comparativos, un fraccionamiento y estudio idéntico se realizó para el veneno entero de individuos de la especie B. asper, capturados en la región del Cauca y Valle. Los resultados obtenidos permiten establecer la presencia de una fracción con actividad tipo PLA2 en los dos venenos analizados y comparar su actividad por el tiempo de desestabilización de las bicapas artificiales, presentando tiempos de ruptura menores para el veneno de M. mipartitus y evidenciando que la actividad enzimática tipo PLA2 aislada del veneno de M. mipartitus, tiene una actividad hemolítica y desestabilizadora de bicapas artificiales mayor que la actividad enzimática tipo PLA2 con actividad hemolítica y desestabilizadora de bicapas artificiales, encontrada en el veneno entero de B. asper.