Evaluación de la actividad antioxidante y citotóxica del extracto etanólico, de las hojas y bulbos de Phaedranassa dubia, (Amaryllidaceae) colectada en el departamento del Cauca

Abstract

La familia Amaryllidaceae es un grupo de plantas poco estudiadas en Colombia. Debido a esto se han creado muchas expectativas, ya que estudios realizados como la actividad antiprotozoal ha mostrado una marcada actividad biológica de algunos de sus metabolitos secundarios, en especial los alcaloides, los cuales han mostrado actividad antiviral, antitumoral e inhibitoria de la acetilcolinesterasa, enzima asociada a la enfermedad de Alzheimer. En este trabajo se evaluó la actividad antioxidante, enzimática y citotóxica in vitro de los extractos etanólicos totales de hojas y bulbos de P. dubia; además se caracterizó por medio de un perfil cromatográfico el tipo de compuestos nitrogenados, fenólicos y azucares libres presentes en dichos extractos. Las hojas y bulbos fueron recolectadas en el Departamento del Cauca; se les realizó una extracción Soxhlet y se evaluó su actividad antioxidante por medio de dos modelos in vitro, DPPH· y ABTS⁺˙; empleando como estándar o control positivo ácido ascórbico, tocoferol y BHT. La inhibición de la actividad enzimática se determinó para las enzimas acetilcolinesterasa, hialuronidasa, tirosinasa, α-glucosidasa y α-amilasa; utilizando como control positivo eserina, ácido tánico, ácido kojico y ascarbosa, respectivamente. La actividad citotóxica se determinó mediante bioensayo con A. salina. Además, se cuantifico mediante un perfil cromatográfico compuestos fenólicos por CLAR/DAD y contenido de compuestos nitrogenados por CG/EM. Los extractos etanólicos totales y las subfracciones evaluadas por los métodos DPPH· y ABTS⁺˙ presentaron un porcentaje de actividad antioxidante superior al 20%, encontrándose que para los dos métodos, en las hojas la fracción butanolica (81,675 % y 71,345 %) presentó un porcentaje de actividad antioxidante mayor comparada con la fracción de hexano, diclorometano, acetato de etilo, etanol y agua, esta actividad se corroboro con el contenido de fenoles totales, estableciendo que la fracción de butanol (152,00 mg ácido gálico/g extracto seco) es la que posee un mayor contenido de compuestos fenólicos totales y por tanto mayor actividad antioxidante. En el caso de los bulbos, existe alguna discrepancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos, ya que la fracción que presentó mayor actividad antioxidante por el método DPPH·, fue la fracción de hexano (80,462 %) y por el método ABTS⁺˙ la fracción butanólica (58,322%), empleando el método de Folin-Ciocalteu se confirmó que la fracción butanólica (121,43 mg ácido gálico/g extracto seco) es la que presenta mayor actividad antioxidante. En la actividad citotóxica se encontró que para las hojas y bulbos la toxicidad crónica (EC50 34,418 y 25,210) es altamente tóxica. En cuanto al perfil cromatográfico obtenido por CG/EM se encontraron varios tipos de alcaloides típicos de la familia Amaryllidaceae, en los bulbos se hallaron galantamina, y sanguinina, licorina, pseudolicorina, 8-O-dimetilmaritidina y diacetilcantabricina, mientras que en las hojas solo se encontraron galantamina y sanguinina. Por CLAR/DAD se obtuvieron dos tipos compuestos fenólicos, en las hojas ácido clorogénico y en los bulbos epicatequina. En la inhibición de actividad enzimática, los resultados fueron muy favorables, ya que el extracto etanólico de hojas y bulbos de Phaedranassa dubia, presento inhibición sobre Acetilcolinesterasa (64,091 % y 63,670 %), enzima asociada a la enfermedad de Alzheimer, además de presentar inhibición sobre Hialuronidasa (59,016 % y 33,115 %), enzima asociada a procesos de envejecimiento, en cuanto a Tirosinasa, α-Glucosidasa y α-Amilasa no se observó inhibición.

The Amaryllidaceae family is a little-studied group of plants in Colombia. Because of this it has created many expectations, since studies as antiprotozoal activity has shown a marked biological activity of some secondary metabolites, especially the alkaloids, which have shown antiviral, antitumor and inhibitory activity of acetylcholinesterase, an enzyme associated with Alzheimer's disease. In this paper the antioxidant, enzymatic and in vitro cytotoxic activity of total ethanol extracts of leaves and bulbs of P. dubia was assessed; its type nitrogenous compounds, phenols and free sugars present in such extracts were also characterized by a chromatographic profile. The leaves and bulbs were collected in the Department of Cauca; underwent Soxhlet extraction and antioxidant activity was evaluated using two in vitro models DPPH· and ABTS⁺˙; using standard positive control or ascorbic acid, tocopherol and BHT. Inhibition of the enzymatic activity was determined for enzymes acetylcholinesterase, hyaluronidase, tyrosinase, α-glucosidase and α-amylase; used as positive control eserine, tannic acid, kojic acid and ascarbosa, respectively. The cytotoxic activity was determined by bioassay A. salina. It was further quantified chromatographic fingerprint phenolic compounds by HPLC/ DAD and content of nitrogen compounds by GC/MS. Total ethanol extracts and subfractions evaluated by DPPH· and ABTS⁺˙ methods showed a higher percentage of antioxidant activity by 20%, found that the two methods, leaves the butanol fraction (81.675% and 71.345%) presented a percent higher antioxidant activity compared to the fraction of hexane, dichloromethane, ethyl acetate, ethanol and water, this activity is corroborated with the content of total phenols, stating that the butanol fraction (152.00 mg gallic acid / g dry extract ) is the one with a higher content of total phenolic compounds and therefore higher antioxidant activity. In the case of bulbs, there is a discrepancy between the results obtained by the two methods, since the fraction showed higher antioxidant activity by DPPH· method was the hexane fraction (80.462%) and by the method ABTS⁺˙ the butanol fraction (58.322%) using the Folin-Ciocalteu method was confirmed that the butanol fraction (121.43 mg gallic acid / g dry extract) is the one with the highest antioxidant activity. In the cytotoxic activity was found that for bulbs leaves and chronic toxicity (EC50 34.418 and 25.210) is highly toxic. As the chromatographic profile obtained by GC/MS various types of typical alkaloids Amaryllidaceae family, the bulbs met galanthamine sanguinine, lycorine, pseudolycorine, 8-O-dimethylmaritidine and diacetylcantabricine were found, while in the leaves only galanthamine and sanguinine found. HPLC/DAD two phenolic compound types in chlorogenic acid in the leaves and bulbs epicatechin were obtained. On the inhibition of enzyme activity, results were very favorable, since the ethanol extract of leaves and bulbs Phaedranassa dubia, presented on acetylcholinesterase inhibition (64.091% and 63.670%), an enzyme associated with Alzheimer's disease, besides presenting inhibition on Hyaluronidase (59.016% and 33.115%), enzyme associated with aging processes regarding Tyrosinase, α-glucosidase and α-amylase no inhibition was observed.