Extracción y cuantificación de los taninos de corteza de Pinus patula utilizando como sustancia de referencia “ácido gálico” por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC)

Abstract

Los ácidos fenólicos son compuestos que se caracterizan por poseer en su estructura química un anillo de carácter aromático y un grupo hidroxilo (común en los compuestos fenólicos), además de una función carboxílica; de éstos compuestos, los que tienen interés terapéutico son los derivados del ácido benzoico como por ejemplo, el ácido gálico, el cual hace parte de la unidad básica estructural de los taninos gálicos o hidrolizables, y los derivados del ácido cinámico correspondientes al cafeico, ferúlico y p-cumárico. Los derivados del ácido cinámico, son abundantes en la naturaleza pero en éste caso se encuentran casi siempre esterificados con azúcares, alcoholes alifáticos, y ácido quínico (ácido clorogénico). Estos compuestos representan del 20 - 40% de la masa seca de la corteza. La fracción lipofílica está constituida por sustancias tales como grasas, ceras, terpenos, terpenoides y alcoholes alifáticos superiores, solubles en disolventes apolares (éter etílico, diclorometano, etc). La fracción hidrofílica está constituida por sustancias que contienen gran cantidad de constituyentes fenólicos, extraíbles en agua o por disolventes orgánicos tales como acetona, alcohol etílico, etc. Los ácidos fenólicos se encuentran presentes en hojas, cortezas y demás partes constituyentes de las plantas y representan un potencial para la industria farmacéutica, alimenticia y en otros campos en donde se requiera su uso. En el departamento del Cauca, especialmente en el norte, se hallan grandes extensiones de cultivos de pino y las empresas propietarias de los mismos, están desarrollando estudios que permitan aprovechar y buscarle una utilidad a los materiales diferentes a la madera como son la corteza, las hojas y las raíces. La corteza, en especial la de Pinus patula, es uno de los materiales no aprovechados en la actualidad; debido a ello, esta investigación examinó las condiciones más favorables para la extracción de los taninos y la cuantificación del ácido gálico contenido en estos compuestos. Para obtener una máxima extracción de los taninos, se evaluaron diferentes condiciones, tales como: Variaciones en la proporción y volumen de diversos solventes, tiempos de extracción, velocidad de agitación, tamaño de partícula de la matriz y temperatura. Tras la extracción, se realizaron pruebas cualitativas utilizando técnicas espectrofotométricas de ultravioleta e infrarrojo del analito purificado. El proceso de cuantificación del ácido gálico en el extracto de corteza de Pinus patula, se realizó utilizando la técnica de Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia (CLAE) con detector ultravioleta, donde las muestras se leyeron a una longitud de onda de 270 nm y flujo de 1,0 mL / min; la fase móvil, estuvo compuesta por una mezcla de ácido fosfórico, agua y metanol (0,1:98,4:1,5%). Para la cuantificación, se construyó una curva de calibración entre 0,5 y 2,5 ppm del patrón de ácido gálico y se graficó el área versus la concentración de cada patrón; posteriormente, se inyectaron las muestras extraídas de la corteza analizada. Con los datos obtenidos, se determinó el contenido total del compuesto; el análisis estadístico de los datos, incluyó además el límite de detección y cuantificación, la precisión, sensibilidad y reproducibilidad.