Daño genético y/o apoptótico inducido in vitro por el tíner (mezcla de solventes orgánicos) en linfocitos humanos de sangre periférica, evaluado a través del ensayo cometa alcalino

Abstract

El tíner es la mezcla de solventes orgánicos más común y frecuentemente empleada entre los trabajadores del sector no formal de la industria colombiana. Como mezcla compleja contiene tolueno, xileno, hexano, etilbenceno, entre otros solventes todos ellos tóxicos para el organismo. Algunos estudios han revelado datos acerca del efecto oxidativo inducido por la inhalación de tíner, tales como la activación de radicales libres, disminución de antioxidantes, y peroxidación de lípidos y proteínas. No obstante, el efecto del tíner sobre el ADN ha sido poco estudiado. Por consiguiente, el objetivo del presente estudio fue evaluar la citotoxicidad y el daño genético y/o apoptótico inducido in vitro por el tíner en linfocitos humanos. La citotoxicidad aguda se determinó mediante el análisis de la viabilidad celular con el colorante de exclusión azul de tripano, después de 4 h de tratamiento con tíner en concentraciones de 0,025 a 1,200 µL/mL. El daño genético y/o apoptótico se evaluó en cultivos tratados durante 1 h con tíner en concentraciones de 0,050; 0,100 y 0,200 µL/mL, mediante la aplicación del ensayo Cometa (pH>13) antes y después de un período de recuperación líquida de 4 h. Lo que permitió identificar si el daño genético observado en el ensayo Cometa es reparable o es debido a una fragmentación nuclear irreparable (apoptósis). Los parámetros de evaluación del daño genético fueron: momento de cola (µm) y porcentaje de ADN en la cola (%). Los resultados de citotoxicidad aguda mostraron una disminución en la viabilidad de los linfocitos, presentando un efecto dependiente de la dosis (R2=0.927, P<0.001), con porcentajes de viabilidad que oscilan entre 92,5 a 66,0%. En el ensayo Cometa, antes del período de recuperación, se evidenció un incremento significativo (P<0.001) del daño en el ADN de linfocitos, observado en cultivos tratados con tíner, con respecto al control negativo (DMSO). Después del período de recuperación, se evidenció una reducción significativa (P<0.05) del daño, por efecto de la reparación de lesiones primarias. Los cultivos tratados a dosis altas de tíner (0,200 µL/mL) fueron los que mostraron mayor daño en el ADN (con promedios ±EE de 38,2 ± 3,3 µm, P<0.001; y 34,7 ± 1,8 %, P<0.001), y a su vez una eficiente reparación del daño (con promedios ± EE de 20.31 ± 2,04 µm, P<0.001; y 23.05 ± 0,88%, P=0.002). Lo anterior demuestra que las lesiones producidas por el tíner son reparadas eficientemente. Por lo tanto, la migración del ADN de los núcleos después de la electroforesis, es el resultado de un daño genotóxico, expresado como quiebres de cadena. En conclusión, los componentes del tíner inducen citotoxicidad y daño genético en linfocitos humanos bajo las condiciones dadas en este estudio, posiblemente por procesos de oxidación o alquilación del material genético. Lo que alerta sobre el posible daño genético que pueden estar experimentando sujetos expuestos ocupacionalmente de manera continua y constante a este tipo de mezcla de solventes, y el riesgo de desarrollar problemas de salud como el cáncer. Sin embargo, el papel del estrés oxidativo o de agentes alquilantes en los efectos tóxicos de tíner, aún requiere ser clarificado.